微生物生長(cháng)曲線(xiàn)分析儀在OD600檢測、介紹以及應用

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OD600的應用

OD600是指在600nm波長(cháng)處的吸光度，常常被用于表示細菌液體培養液中的細菌濃度。在細菌連續培養過(guò)程中，在不同的時(shí)間點(diǎn)檢測菌液的OD600值，然后以時(shí)間為橫坐標，OD600為縱坐標，描繪細菌的生長(cháng)曲線(xiàn)。結合生長(cháng)曲線(xiàn)，可以評估細菌所處的生長(cháng)階段，進(jìn)而可以確定合適的誘導表達或收獲的時(shí)間點(diǎn)。

圖1 大腸桿菌生長(cháng)曲線(xiàn)

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OD600的檢測原理

菌液是一種非均相的懸濁液，當入射光照射在菌液上時(shí)，光線(xiàn)被細菌（菌體）所散射，所以?xún)x器檢測到的“吸光度”實(shí)際上是由散射和吸收綜合作用產(chǎn)生的，而不是如均相溶液中一般是由于溶質(zhì)分子光吸收引起的。

當使用不同型號的設備來(lái)檢測同一樣本的吸光度時(shí)，可能會(huì )得到不同的OD600，這與儀器的光路設計有關(guān)。儀器的檢測器與樣本之間的距離（d）和檢測器的大?。≧）都會(huì )對吸光度產(chǎn)生影響。如圖2所示，當檢測器位于d1時(shí)，散射光可以被檢測器接收到，此時(shí)吸光度較小，而當檢測器位于d2時(shí)，光不能被檢測器接收到，此時(shí)吸光度較大。

圖2 菌液光散射的示意圖（Stevenson et.al,2016）

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使用不同的設備檢測OD600

不同設備檢測到的OD600不能直接比較。如圖3所示，使用5個(gè)型號的設備（Biomat3，ND 2000 A，ND 2000 B，Genesys，Beckman DU530）分別對不同稀釋倍數（X1，X2，X5，X10）的樣本進(jìn)行OD600檢測。結果顯示不同的設備對同一樣本的OD600檢測值不一樣。如果需要比較不同設備間的OD600值，需要先確定相同樣品在不同設備上檢測得到的吸光度值之間的恒定偏差或者比率，然后進(jìn)行校準。

圖3 不同型號的儀器OD600檢測結果（Stevenson et.al,2016）

因此當進(jìn)行細菌菌株篩選、培養基優(yōu)化、添加劑評估等需要比較微生物生長(cháng)曲線(xiàn)的研究工作時(shí)，最好選擇同一型號的設備進(jìn)行實(shí)驗，保證實(shí)驗條件的一致性。

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