實(shí)驗目的

　　多肽疫苗是按照病原體抗原基因中已知或預測的某段抗原表位的氨基酸序列，通過(guò)化學(xué)合成技術(shù)制備的疫苗?；谥|(zhì)的遞送系統已被確立為誘導體液和細胞免疫反應的強大遞送系統，目前應用最為廣泛的是脂質(zhì)體和脂質(zhì)納米粒(lipid nanoparticle, LNP)。脂質(zhì)體可以包裹水溶性和脂溶性藥物，增強抗原蛋白的穩定性，并通過(guò)儲存效應促進(jìn)疫苗成分的逐漸釋放，更適合遞送親水性多肽分子，但仍存在穩定性較差，包封率較低的問(wèn)題。本研究選擇脂質(zhì)體作為免疫遞送系統構建多肽疫苗，設計構建了脂質(zhì)體的處方工藝，并通過(guò)單因素實(shí)驗對脂質(zhì)體制備的處方工藝進(jìn)行優(yōu)化。

實(shí)驗方法

　　超聲功率的選擇

　　以?xún)?yōu)化后的膜材比制備脂質(zhì)體，在保持其他因素不改變的情況下，考慮到超聲功率過(guò)大會(huì )導致大量發(fā)熱，依次改變超聲功率(30、40、50、60 W)(儀器：超聲波細胞粉碎機)，繼續進(jìn)行4組實(shí)驗，分別測定各組脂質(zhì)體粒徑分布和多分散系數。

　　超聲次數/時(shí)間的選擇

　　以?xún)?yōu)化后的膜材比、超聲功率制備脂質(zhì)體，在控制其他因素不改變的情況下，依次改變超聲次數(30,40,50,60)，繼續進(jìn)行4組實(shí)驗，分別測定各組脂質(zhì)體粒徑分布和多分散系數。

實(shí)驗結果

　　超聲功率的篩選結果

　　由表1可知，當超聲功率為30 W、平均粒徑為162.2 nm、PDI為18.3%時(shí)，所制備的脂質(zhì)體最好;當超聲功率為60 W時(shí)，功率較大導致溶液溫度明顯升高，脂質(zhì)體的粒徑偏大，PDI為0.351,分散程度也明顯變大，不適合作為制備條件。

　　超聲次數的篩選結果

　　由表2可知，當超聲次數為40次時(shí)，所得脂質(zhì)體物理性質(zhì)最優(yōu)。實(shí)驗過(guò)程中發(fā)現，當超聲次數為60次時(shí)，置于超聲破碎機內的樣品溶液溫度較高，從表2結果也可以看出，過(guò)高的溫度導致所制備的脂質(zhì)體平均粒徑和PDI升高，提示在脂質(zhì)體制備過(guò)程中要考慮溫度的影響。

實(shí)驗討論

　　脂質(zhì)體的理化性質(zhì)是決定脂質(zhì)體發(fā)揮作用效果的重要影響因素，粒徑及其分布是判斷脂質(zhì)體是否合格的重要指標。研究表明，納米顆粒(<200 nm)更容易通過(guò)淋巴引流進(jìn)入淋巴結，并促進(jìn)抗原提呈細胞的吸收，使其更適合傳遞分子佐劑和抗原。單因素實(shí)驗得到的最優(yōu)的制備條件為：膜材比5∶1、超聲功率30 W、超聲次數40次、高壓均質(zhì)時(shí)間6 min，使脂質(zhì)體的平均粒徑從329.7 nm減小至132.0 nm，對此制備流程進(jìn)行了驗證，其結果與預期相符，且PDI均在30%以下，說(shuō)明脂質(zhì)體粒徑分布比較均勻。